影響電泳加工程度的因素

1.電滲效應(yīng)

在支持物的電泳中，影響電泳的另一個(gè)重要因素是電滲效應(yīng)。電滲是指液體在電場(chǎng)中相對(duì)于固體支持物的運(yùn)動(dòng)。比如在pH8.6，當(dāng)血清蛋白停止紙電泳時(shí)，丙種球蛋白和其他蛋白一樣，帶負(fù)電，應(yīng)該向正極移動(dòng)，但卻向負(fù)極移動(dòng)，這就是電滲的作用。帶負(fù)電荷的濾紙纖維之間有許多小孔，如一束毛細(xì)血管，蛋白質(zhì)在停止電泳時(shí)通過這些小孔向前移動(dòng)。

孔隙帶負(fù)電，可以像帶電粒子一樣吸引正離子，所以介質(zhì)沿管壁的相對(duì)區(qū)域帶有更多的正電荷。在電場(chǎng)中，帶負(fù)電的蛋白質(zhì)向正電極移動(dòng)，而介質(zhì)向相反的陰極移動(dòng)，從而阻礙了蛋白質(zhì)顆粒的電泳處理。

由于γ球蛋白分子粒徑大、凈電荷少、移動(dòng)速度慢，電滲作用大于粒子正向電泳處理的力，γ球蛋白的作用是后退。而對(duì)于其他血清蛋白，由于分子較小，凈電荷較多，電滲效應(yīng)小于分子向前運(yùn)動(dòng)的力，所以分子向前運(yùn)動(dòng)。因此，血清蛋白電泳后，球蛋白反而落后于斑點(diǎn)方向。

2.溶液的離子強(qiáng)度

溶液的離子強(qiáng)度是另一個(gè)重要的選擇條件，在滿足緩沖能力的前提下，離子強(qiáng)度要小。溶液的離子強(qiáng)度越高，帶電粒子的電泳處理速度越慢，反之亦然。高濃度的緩沖溶液具有較低的電阻和較高的電流，并在適當(dāng)?shù)碾妷合庐a(chǎn)生較高的熱量。假設(shè)額定熱可以溶解，高濃度緩沖液的弛豫常數(shù)較低，會(huì)產(chǎn)生較窄的電泳帶。當(dāng)離子強(qiáng)度很高時(shí)，應(yīng)使用低電壓，以避免過度發(fā)熱，導(dǎo)致電泳時(shí)間長，難以分別增加變性和區(qū)帶。3.溶液的酸堿度。

溶液的酸堿度選擇帶電粒子的解離水平，也選擇物質(zhì)的凈電荷。對(duì)于蛋白質(zhì)、氨基酸等電解質(zhì)，溶液pH值離電點(diǎn)越遠(yuǎn)，顆粒凈電荷越多；電泳速度越快；否則，速度越慢。比如血清中幾種主要蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)不同，白蛋白的等電點(diǎn)為4.0。α球蛋白的等電點(diǎn)為5.06，β球蛋白為5.1，γ球蛋白為7.1。在pH8.6電泳緩沖液中進(jìn)行電泳時(shí)，這些蛋白質(zhì)都帶負(fù)電荷，其電泳處理速度為白蛋白<α2球蛋白>β球蛋白>γ球蛋白。因此，當(dāng)要分離蛋白質(zhì)的混合物時(shí)，應(yīng)該選擇能夠擴(kuò)大各種蛋白質(zhì)電荷差異的酸堿度，以促進(jìn)各種蛋白質(zhì)分子的解離。同時(shí)，為了在電泳過程中保持溶液的酸堿度穩(wěn)定，還應(yīng)使用緩沖溶液。